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    超全! 宿主細胞蛋白殘留檢測的法規要求和檢測方法寶典來(lái)了!

    點(diǎn)擊次數:146 更新時(shí)間:2024-05-30

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    宿主細胞蛋白(HCP)的法規要求對于確保生物制藥產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性至關(guān)重要。經(jīng)測試,殘留的HCP可能引起不良反應,如免疫反應,也需要關(guān)注到的是殘留的HCP可能影響藥物的活性,導致藥物效果降低,影響治療效果。這些負面影響會(huì )直接導致藥物的安全性問(wèn)題,甚至可能對患者的健康產(chǎn)生威脅。例如,某些研究表明,ECP(大腸桿菌多肽)的存在與抗ECP抗體和抗rhGH抗體的產(chǎn)生相關(guān),可能導致免疫反應等。

    HCP殘留含量也被認為是生物制品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA),是工藝穩健性監測的重要評價(jià)指標,也是產(chǎn)品的重要質(zhì)控指標。對于HCP的法規要求是多層次、多方面的,旨在確保生物制藥產(chǎn)品的安全性、有效性和質(zhì)量。許多國家和地區的藥品監管機構都要求生物藥物在上市前必須進(jìn)行HCP殘留的檢測。這是為了確保藥物的安全性和有效性,滿(mǎn)足法規要求。制藥企業(yè)應嚴格遵守相關(guān)法規要求,采用合適的檢測方法和控制策略,確保HCP殘留量在可接受范圍內。


    1.國際法規要求:

    • ICH Q6B指南:國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調會(huì )(ICH)的Q6B指南指出,需要根據ICH準則采用敏感且經(jīng)過(guò)驗證的有效方法來(lái)監控殘留的HCP,其殘留量通常要求小于100ppm。

    • 美國藥典(USP):USP<1132>章節規定,用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCP,其含量應該低于檢測限(通常小于100ppm,即1mg總蛋白中HCP含量應小于100ng,也即<0.01%)。

    歐洲藥典(EP):EP 2.6.34中規定,在生物制品中,HCP的含量應當小于0.1%。

    2.國家/地區藥典要求:

    中國藥典(2020版):

    • 針對CHO細胞,HCP殘留需要<0.05%(相當于小于500ppm)。

    • 針對E.coli,HCP殘留需要<0.01%。

    • 其他國家:不同國家和地區的藥典可能有各自的HCP殘留標準,但都旨在確保生物制藥產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量。




    而在實(shí)驗室中常規的宿主細胞蛋白殘留

    檢測方法如下:



    1

    酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

    • 原理:利用特異性抗體與宿主蛋白結合,通過(guò)測定抗原-抗體反應來(lái)定量宿主蛋白的殘留水平。

    • 優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,可用于定量檢測。

    • 缺點(diǎn):需要有針對特定HCPs的抗體,可能產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性的結果。

    • 自動(dòng)化:可以使用自動(dòng)化工作站,如Biomek i7,來(lái)提高準確性和檢測通量。

    2

    二維電泳-質(zhì)譜聯(lián)用法(2D-PAGE-MS)

    • 原理:基于蛋白質(zhì)分子量和等電點(diǎn)差異進(jìn)行分離,通過(guò)質(zhì)譜分析進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。

    • 優(yōu)點(diǎn):可檢測更廣泛的HCPs,提供全面的蛋白質(zhì)譜。

    • 缺點(diǎn):操作復雜,需要較高的技術(shù)水平。

    3

    多肽映射法

    • 原理:通過(guò)蛋白質(zhì)酶切、高效液相色譜、質(zhì)譜等步驟,獲得蛋白質(zhì)的多肽圖譜,進(jìn)行結構鑒定和定量分析。

    • 優(yōu)點(diǎn):準確性高,適用于復雜樣品的分析。

    • 缺點(diǎn):操作步驟復雜,需要較高的技術(shù)水平和專(zhuān)業(yè)設備。

    4

    電泳法

    • 包括CIE(毛細管電泳)、SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)等。

    • 優(yōu)點(diǎn):反應時(shí)間短、靈敏性高(如CIE)。SDS-PAGE簡(jiǎn)便、快速、重復性好。

    • 缺點(diǎn):分辨率低(如CIE、SDS-PAGE)、不能精確定量(如SDS-PAGE)。

    5

    質(zhì)譜法

    • 原理:直接檢測蛋白質(zhì)的質(zhì)量和結構,通過(guò)比對目標蛋白和宿主蛋白的質(zhì)譜圖譜進(jìn)行定量分析。

    • 優(yōu)點(diǎn):高靈敏度、高分辨率,可同時(shí)檢測多個(gè)宿主蛋白。

    • 缺點(diǎn):需要復雜的樣品準備和數據分析過(guò)程。

    6

    生物活性測定法

    • 原理:通過(guò)測定宿主蛋白對生物活性的影響來(lái)驗證殘留。

    • 優(yōu)點(diǎn):提供宿主蛋白殘留對藥物活性的直接影響信息。

    • 缺點(diǎn):可能在特定情況下不夠敏感或特異性。




    在選擇宿主細胞蛋白殘留檢測方法時(shí),需要考慮多個(gè)因素,包括所需的靈敏度和準確性、樣品的復雜性、以及可用的設備和技術(shù)水平。通常,結合多種方法可以確保最終藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性。




    今天小貝帶來(lái)了




    基于ELISA的自動(dòng)化檢測宿主細胞蛋白殘留標準化流程——標準化無(wú)人值守

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    圖1. 自動(dòng)化HCP檢測流程展示




    更高線(xiàn)性的標曲——高精度移液體現

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    自動(dòng)化

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    人工

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    圖2. 使用CygnusTM CHO HCP ELISA 試劑盒對于自動(dòng)化再現性的驗證。手工和自動(dòng)化的標曲比較結果如圖二A和B所示,對比R2的數值自動(dòng)化動(dòng)化結果更好。




    穩定的結果保證——高重現性

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    使用Biomek i7自動(dòng)化工作站完成對不同時(shí)間宿主細胞培養基和細胞裂解液的蛋白定量檢測。





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