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    【超離應用】快速密度梯度形成技術(shù),優(yōu)化病毒載體純化流程

    點(diǎn)擊次數:169 更新時(shí)間:2024-05-30


    01

    技術(shù)背景


    隨著(zhù)現代生物醫學(xué)研究的不斷深入,病毒載體作為一種強大的工具,在基因治療和基因編輯等領(lǐng)域發(fā)揮著(zhù)至關(guān)重要的作用。然而,病毒載體的純化過(guò)程往往耗時(shí)且復雜,這在一定程度上限制了相關(guān)研究的進(jìn)展。今天,我們就來(lái)探討一種全新的方法——利用VTi 90垂直轉子與CsCl(氯化銫)密度梯度離心技術(shù),來(lái)加速病毒載體的純化過(guò)程,提高實(shí)驗效率。



    02

    方法介紹


    研究團隊通過(guò)使用VTi 90垂直轉子和Optima XPN超速離心機,結合CsCl密度梯度離心技術(shù),對病毒載體純化過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)多段離心,調整離心速度和離心時(shí)間,實(shí)現了在更短時(shí)間內達到密度梯度平衡的目標。






    03

    實(shí)驗過(guò)程


    在實(shí)驗中,研究團隊首先將病毒載體樣品與CsCl溶液混合,然后將其加入Quick-Seal熱封管中。再使用VTi 90轉子進(jìn)行離心,通過(guò)調整離心速度和離心時(shí)間,使樣品在離心管內形成穩定的密度梯度。離心結束后,通過(guò)分餾的方式收集不同密度的樣品組分,并使用折射儀測量各組分并繪制密度梯度曲線(xiàn)。通過(guò)比較不同實(shí)驗步驟的密度梯度曲線(xiàn),找到與舊步驟密度梯度曲線(xiàn)相同的實(shí)驗條件,確保了樣品條帶位于相同位置。


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    離心結果示意圖:


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    04

    實(shí)驗結果


    基于 Optima XPN超速離心機對于分段離心步驟設置的支持(在一次運行中運行多個(gè)轉速步驟),研究團隊最終找到了一種能夠在80分鐘(50+30分鐘)內達到密度梯度平衡的優(yōu)化方案,較之前16小時(shí)的舊步驟提升了近12倍效率。


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    1. 以更高的速度開(kāi)始分離可以幫助更快地形成密度梯度。

    2. 將運行速度降低足夠長(cháng)的時(shí)間可以:

    • 與現有的(較慢的)步驟獲得相同的效果,將目標條帶保留在相同的位置。

    • 平坦化密度梯度曲線(xiàn),可提供更高的條帶分辨率。





    05

    結語(yǔ)


    加速密度梯度形成、優(yōu)化病毒載體純化效率是一項具有重要意義的研究工作,不僅為病毒載體純化領(lǐng)域帶來(lái)了新的突破,也為廣大科研工作者提供了更高效、更便捷的實(shí)驗方法,從而降低了實(shí)驗成本和時(shí)間成本,為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供了有力支持!

    如果您對以上方案感興趣,不妨看看相關(guān)離心產(chǎn)品,以下組合搭配即助您輕松實(shí)現病毒載體純化流程:



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    Optima X系列智能型超速離心機



    Optima XPN系列配備益于初學(xué)者操作的 eXpert 智能軟件程序,同時(shí)為密度梯度離心等方法提供強大支持。產(chǎn)品還具有增強型數據管理功能,支持客戶(hù) GMP 流程。

    主要型號:Optima XPN-100 / 90 / 80

    基礎型號:Optima XE-100 / 90

    最大轉速(rpm):100,000 / 90,000 / 80,000

    最大相對離心力(xg):802,000 / 694,000 / 548,300



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    Vti 90垂直轉子



    Vti 90垂直轉子,最大相對離心力可達到645,000xg,最大轉速下K因子低至6。分離沉降系數約為60s的空殼AAV顆粒,僅需80min,為分離病毒顆粒的理想選擇。

    • 最大RPM:90 ,000

    • 最大RCF:645,000 xg

    • K因子:6

    • 離心管數量/體積/大小/尺寸:

    ? 8 x 5.1mL

    ? ? x 2 in

    ? 13 x 51 mm

    • 轉頭容量:40.8mL



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